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菌种、感受态细胞

感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验中频繁使用的重要操作,感受态细胞制备的方法是Cohen等人于1972年建立的,该方法的主要原理是细菌通过冰冷的CaCl2低渗溶液处理后,加入待转化质粒DNA,经42 ℃短时间热冲击,细菌细胞可增加对该质粒DNA的摄入,该法已成为目前实验室制备感受态细胞的常规实验方法。

导 航
TEV商用质粒
服务项目

pET28a-TEV蛋白酶基因质粒使用说明:

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

     4、42℃热激90s,再冰浴2min;

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

     6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

     8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

 

pET28a-TEV蛋白酶基因质粒注意事项

 

      1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。

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