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菌种、感受态细胞

感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验中频繁使用的重要操作,感受态细胞制备的方法是Cohen等人于1972年建立的,该方法的主要原理是细菌通过冰冷的CaCl2低渗溶液处理后,加入待转化质粒DNA,经42 ℃短时间热冲击,细菌细胞可增加对该质粒DNA的摄入,该法已成为目前实验室制备感受态细胞的常规实验方法。

导 航
Rosetta-gami B(DE3)pLysS
服务项目

Rosetta-gami B(DE3)pLysS感受态细胞

细胞名称:         Rosetta-gami B(DE3)pLysS, Rosetta-gamiB(DE3)pLysS, Rosetta gami B DE3 pLysS, Rosetta-gami B DE3 pLysS

菌株类型: E.coli

培养基:       LB培养基

生长条件:       37 ℃,  有氧      

基因型:       Rosetta-gami B(DE3)pLysS感受态细胞菌株基因型

抗  性:       氯霉素,卡那霉素,四环素

质粒转化条件:       42 ℃热激      

应    用:       蛋白表达

诱导方法:       IPTG


菌株特点:

Rosetta-gami B系列菌株来源于Origami B系列菌株,是集合了BL21系列,Rosetta系列菌株和Origami系列菌株的优点,极大的。


Rosetta-gami B系列菌株是来源于Origami B系列菌株,携带有TrxB和Gor基因突变,提高含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。


本菌株含有pRARE质粒,能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有 的AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA六个稀有密码子的tRNA外,增加了真核细胞的在大肠杆菌中的蛋白表达水平。


Rosetta-gami B(DE3)pLysS菌株在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变,这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键,有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。


TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性,所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。


Rosetta-gami B(DE3)pLysS感受态细胞来源于含有BL21系列菌株中的lacZY基因突变,能够通过IPTG高效控制目的基因的表达。


DE3是溶源性的 λDE3, 所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。


含有pLSs质粒,pLySs质粒能够产生T7溶菌酶,Rosetta-gami B(DE3)pLysS感受态细胞可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。


Rosetta-gami B(DE3)pLysS感受态细胞能够用于氨苄抗性和壮观霉素抗性质粒的原核表达。



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