TEV Protease (烟草蚀纹病毒蛋白酶;Tobacco etch virus protease) 

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产品说明:

TEV Protease(His-tag)是一种在大肠杆菌中重组表达的带His标签(6X His tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。

TEV Protease的最佳酶切温度是30℃，在29-34℃范围内均具有较高的酶活性，但当温度达到或高于高37℃时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃用TEV Protease酶切过夜。TEV Protease在pH6.0-9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。

TEV Protease还有一个突出的优点是在400mM咪唑中仍有较高活力，因此对于很多用镍柱纯化的His标签目的蛋白，可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中，在4℃边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白，溶液中带有His标签的本TEV Protease以及切除下来的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。

TEV Protease的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibtor)如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin、E-64、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV Protease的酶活力，因为天然的TEV Protease含有其维持酶活力所必需的Cys151。

活性定义:

30℃，pH8.0条件下反应1小时，能够切割3µg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。

活性测定条件:

50mM Tris-HCL(pH7.8)，0.5mM EDTA，0.5mM DTT，30°C温育1h。

浓度：TEV Protease分子量大小约28kDa，纯度：≥95%。

保存条件： 

TEV Protease冻干粉存储于-20℃，24个月稳定；25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 50%(v/v)甘油, pH8.0溶解后存于-20℃，频繁使用无活性损失。

特点与应用

在TEV蛋白酶的识别位点切断肽键，将目的蛋白肽段从融合蛋白中回收

酶贮存缓冲液

TEV Protease储存液组成为：25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 50%(v/v)甘油, pH8.0。

10X TEV Buffer组成为：500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 5mM EDTA, 10mM DTT, pH8.0。

应用体系距离：

注意事项 

1、为达到最好的酶切效果，请确保酶切反应中重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。

2、对于大部分重组蛋白，为达到较好的酶切效果，重组TEV蛋白酶可在 NaCl 浓度为 100mM 的反应液中进行反应。如有需要，可根据实际情况在 50mM-150mM 之间调节 NaCl 的浓度以达到理想效果。切记实验中一定要考虑酶及融合蛋白中的盐离子浓度。

3、保持咪唑浓度低于 400mM，若高于 400mM 会影响 TEV蛋白酶 的活性。

样品信息：

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